Sık Sorulan Sorular

Nasıl sipariş verebilirim?

Sipariş vermek için online sipariş sistemimize kayıt olup (order.sentebiolab.com.tr) siparişlerinizi kolayca verebilir, verdiğiniz siparişlerin üretim ve teslimat durumlarını takip edebilirsiniz. Sipariş sistemimizin kullanımı için detaylı bilgiyi aşağıda bulunan kullanım kılavuzumuzu inceleyerek edinebilirsiniz.

Sipariş verdiğim primerler ne zaman teslim edilir?

Standart saflaştırma ve OPC yapılan primerleriniz sentezin ertesi günü, teslime hazır olmaktadır. Sisteme girdiğiniz siparişleriniz için üretim ekibimiz sistem kayıtlı olan mail adresine teslimat maili atmaktadır. HPLC saflaştırma yapılan primerleriniz / modifiyeprimer ve probe’larınız için lütfen bizimle iletişime geçiniz. Rutin sentez programımız aşağıda verilmiştir:

Pazartesi Salı Çarşamba Perşembe Cuma
50 nmol (50 baz altı) 10:00 10:00 10:00
50 nmol (50 baz üstü) 10:00
100 nmol (50 baz altı) 16:00 16:00
200 nmol (50 baz altı) 16:00

Hangi saflaştırma türünü seçmeliyim?

Saflaştırma olarak Standart (DSLT-desalting) saflaştırma, OPC ve HPLC seçenekleri mevcuttur.

Standart saflaştırma

Standart saflaştırma olarak desalting işlemi gerçekleştirilir ve primerler istenmeyen tuzlardan arındırılır. 35 baz ve daha kısa oligolar için, PCR uygulamalarında kullanılacak oligolar da dahil olmak üzere (n-1) ürünlerin önem arz etmediği birçok uygulama için bu yöntem kullanılabilir.

OPC saflaştırma

OPC yöntemi ile hatalı sekanslar (n-1 gibi), yan ürünler, kirlilikler elenir. Bu yöntem ile elde edilen primerler polimorfizm analizleri, sekans, PCR ve gen sentezi için kullanılabilir. 60 Baz uzunluğundaki nükleotidlere kadar OPC purifikasyonu tavsiye edilir.

HPLC saflaştırma

HPLC yöntemi tüm n-1 oligo yan ürünlerinden kurtulmak için en etkili yöntemdir. Klonlama çalışmaları gibi tek bazlık hataların tolere edilmeyeceği çalışmalar için tercih edilebilir. Ayrıca modifiye oligonükleotidler için de tavsiye edilen saflaştırma yöntemidir. 50 nmol- HPLC saflaştırma seçeneğinde miktar garantisi bulunmamaktadır.

Hangi skalada sipariş vereceğimi nasıl belirleyebilirim?

Aşağıdaki tablo 100 µl PCR reaksiyonunda son primer konsantrasyonu olarak 0.1-0.5µM kullanıldığı kabul edilerek hazırlanmıştır:

Sentez Skalası Tahmini PCR reaksiyon sayısı
50 nmol 500 – 2500
100 nmol 1000 – 5000
200 nmol 4000 – 20000

Tercih ettiğim sentez skalası bana teslim edilen ürün miktarı ile aynı mı olmalıdır?

Tercih edilen skala senteze başlama miktarını belirlemektedir. Saflaştırma türüne göre teslim edilecek ürün miktarı değişkenlik göstermektedir. Farklı skala ve saflaştırma türlerinde teslim edilebilecek en düşük ürün miktarı aşağıdaki tabloda verilmiştir. Bu miktarlar modifiye oligonükleotid/hidroliz probları için geçerli değildir.

Skala (nmol) Saflaştırma min. OD
50 desalt 2
OPC 1
HPLC 1
100 desalt 6
OPC 4
HPLC 4
200 desalt 12
OPC 8
HPLC 8

Tüplerin içinde ürün görünmüyor. Sebebi ne olabilir?

Sentezlenen tüm oligonükleotidler kurutulmuş (liyofilize) halde teslim edilmektedir.

Ürünlerin renksiz olması nedeniyle kurutulmuş halde tüpte farkedilmeleri, özellikle düşük skalada, oldukça zordur. Primerler ile birlikte gönderilmiş olan üretim raporuna uygun olarak sulandırıp deneylerinize başlayabilirsiniz.

Tüplerin dibinde jelimsi, hafif kahverengi bir ürün var. Normal midir?

100 nmol ve 200 nmol sentezlerde ürün yoğunluğundan dolayı kurutma sonrası bu görüntü oluşabilmektedir.Primerinizi standart şekilde sulandırıp çalışabilirsiniz.

Oligonükleotidlerim elime ulaştı, hangi koşullarda saklamalıyım?

Liyofilize olarak teslim edilen primerler gönderim esnasındaki sıcaklık değişimlerinden olumsuz etkilenmez. Ancak raf ömrünü uzatmak amacıyla teslim aldıktan sonra +4⁰C/-20⁰C’de saklamanızı tavsiye etmekteyiz. Sulandırılan primerlerin saklama sıcaklığı -20 ºC dir.

Primerlerinizi uzun süreli saklamak için TE Buffer ile çözünüz ve stok primerlerinizi don-çöz yapmayınız, kullanacağınız kadar seyreltip bölünmüş porsiyonlar (aliquot) halinde muhafaza ediniz.

Saklama Koşulları Sıcaklık Maksimum Depolama Süresi
Liyofilize -200C < 1 yıl
Liyofilize Oda sıcaklığı 1 ay’a kadar
Solüsyon içerisinde -200C < 6 ay
Solüsyon içerisinde Oda sıcaklığı 1 hafta’ya kadar

Primerler için garanti süreci nasıl işlemektedir?

Primerleriniz kullanım kılavuzuna uygun bir şekilde sulandırıldı, saklandı ancak çalışmıyor ise aşağıdaki koşulları sağlaması durumunda garanti kapsamında ücretsiz olarak tekrar sentezlenecektir.

  • Oligonükleotid dizisinin bir yayından alınmış olması (ilgili yayını lütfen e-mail ile bize iletiniz) ya da,
  • Daha önce laboratuvarınızda rutin olarak kulllanılmakta olan bir dizi olması.

Oligonükleotidlerimi nasıl sulandırmalıyım?

100 µM ana stok için eklenmesi gereken çözücü miktarı ürünler ile birlikte gönderilmiş olan kullanım kılavuzunda (datasheet) yer almaktadır.

Oligonükleotidleri çözmek için TE (Tris-EDTA tampon çözeltisi) veya DNaz/RNaz içermeyen su (DNase/RNase free water/DEPC water) kullanılabilir.

Primerlerin çalışma konsantrasyonu ne olmalıdır?

Kullanılacak primer konsantrasyonu çalışılacak yönteme bağlı olarak değişkenlik gösterebilir.

Rutin PCR uygulamaları için 10 µM ara stok oluşturup 25 µl PCR reaksiyonu için bu ara stoktan 0.5 µl kullanılabilir.

Primer/probe dizaynı yapıyor musunuz?

Primer/probe dizaynı hizmetimiz bulunmaktadır. Dizaynı bizim tarafımızdan yapılan primer/probe’lar her türlü optimizasyonu yapılıp optimizasyon raporu ile birlikte çalışır halde teslim edilmektedir.

Bunun için bu hizmeti paket halinde aşağıdaki kalemleri kapsayacak şekilde vermekteyiz:

  • Primer/probe dizaynı
  • PCR optimizasyonu
  • Pozitif kontrol (gen fragmenti) sentezi

Modifiye primer üretimi yapıyor musunuz?

Aşağıdaki listede yer alan modifikasyonlara sahip oligonükleotidlerin üretimini rutin olarak yapmaktayız.

  • -5’FAM
  • -5’HEX
  • -5’TET
  • -5’JOE
  • -5’ Biotin
  • -5’Amine
  • -5’Fosfat
  • -5’Thiol
  • -3’TAMRA
  • -3’Amine

Eğer istediğiniz modifikasyon bu tabloda yer almıyorsa lütfen bizimle iletişime geçiniz.

Probe üretimi yapıyor musunuz ?

  • Aşağıdaki tabloda yer alan boya ve quencher’ları içeren Taqman probe’larının üretimini yapmaktayız.
  • Eğer istediğiniz probe’a ait boya/quencher bu tabloda yer almıyorsa lütfen bizimle iletişime geçiniz.
Probe boya-quencher tablosu
5′ 3′
FAM TAMRA
FAM BHQ-1
HEX BHQ-1
JOE BHQ1

Modifiye primer/probe siparişim için boya/quencher’ları nasıl seçmeliyim?

  • Modifiye primer/probe’larınızda kullanılacak boyaların excitation ve emission dalga boyları kullanılacak qPCR cihazının lazer ve filtreleri ile uyumlu olmalıdır.
  • Cihazınıza ait lazer ve filtre bilgilerine cihazınızın web sitesi/kullanım kılavuzundan ulaşabilirsiniz.
  • Modifiye primer/probe üretiminde kullanmakta olduğumuz boyalara ait excitation/emission dalga boyları aşağıdaki tabloda verilmiştir:
Boyaların excitation emission değer tablosu
Boya Excitation (nm) Emission (nm)
FAM 494 518
HEX 535 556
TAMRA 555 580
Taqman probe’ları için önerilen boya/quencher çiftleri tablosu
5′ 3′
FAM TAMRA
FAM BHQ-1
HEX BHQ-1
JOE BHQ1